МОЛЕКУЛЯРНАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ АЗОТФИКСИРУЮЩИХ БАКТЕРИЙ AZOSPIRILLUM

А.А. Налбандян, Н.В. Безлер

Скачать

№ 4 (32)

Генетика. Селекция. Биотехнологии

Аннотация: 

Целью работы являлось апробирование и подбор родо-специфических пар праймеров для достоверной идентификации азотфиксирующих микроорганизмов – грамотрицательных бактерий рода Azospirillum. В ходе работы была модифицирована методика экстракции суммарной ДНК изолятов бактерий из их биомассы – чистой культуры. Проводились экспериментальные исследования по подбору родо-специфического молекулярного маркера для надежной идентификации. Были оптимизированы и условия проведения полимеразно-цепной реакции (ПЦР). Амплификация суммарной ДНК бактерий с праймером Az16S-A F / Az16S-A R выявила у всех изучаемых номеров наличие ампликона размером в 640 п. н., что подтверждает принадлежность всех трех исследуемых образцов к роду Azospirillum. В результате проведенных экспериментов апробирован и отобран родо-специфический праймер Az16S-A F / Az16S-A R, позволивший выделить штаммы рода Azospirillum в чистой культуре (3 штамма). Полученные экспериментальные данные по молекулярному маркеру позволяют образцам штаммов, принадлежность которых к данному роду подтверждена ПЦР анализом, служить как положительным, так и отрицательным контролем при дальнейшей работе с бактериями.

 

Ключевые слова: 

ДНК, полимеразно-цепная реакция, праймер, бактерии, Azospirillum

 

Для цитирования: 

Налбандян, А. А. Молекулярная идентификация азотфиксирующих бактерий Azospirillum / А. А. Налбандян, Н. В. Безлер // Лесотехнический журнал. – 2018. – Т. 8. – № 4 (32). – С. 19–22. – Библиогр.: с. 22 (10 назв.). – DOI: 10.12737/article_5c1a3206dad755.50307403.

 

Литература: 
  1. Bashan Y., Holguin G., De-Bashan L. Azospirillum-plant relationships: physiological, molecular, agricultural and environmental advances Can J Microbiol, 2004, Vol. 50, pp. 521-577.
  2. Braun-Kiewnick A. [et al.] Development of species-, strain- and antibiotic biosynthesis-specific quantitative PCR assays for Pantoea agglomerans as tools for biocontrol monitoring. Journal of Microbiological Methods, 2012, Vol. 90, pp. 315-320.
  3. Fukami J., Cerezini P., Hungria M. Azospirillum: benefits that go far beyond biological nitrogen fixation. AMB Express, 2018, Vol. 8, pp. 73-85.
  4. Hussein A., Nalbandyan A., Fedulova T., Bogacheva N.  Efficient and nontoxic DNA isolation method for PCR analysis. Russian Agricultural Sciences, May 2014, Vol. 40, Issue 3, pp. 177-178.
  5. Mahuku G. S. A simple extraction method suitable for PCR-based analysis of plant, fungal, and bacterial DNA Plant Mol. Biol. Rep, 2004, Vol. 22, pp. 71-81.
  6. Rogers S., Bendich A. Extraction of DNA from milligram amounts of fresh, herbarium and mummified plant tissues. Plant Molecular Biologi, 1985, Vol. 5, pp. 67-69.
  7. Scarpellini M., Franzetti L., Galli A. Development of PCR assay to identify Pseudomonas fluorescens and its biotype. FEMS Microbiology Letters, 2004, Vol. 236, pp. 257-260.
  8. Shime-Hattori A., Kobayashi S., Ikeda S., Asano R. A rapid and simple PCR method for identifying isolates of the genus Azospirillum within populations of rhizosphere bacteria. Journal of Applied Microbiology, 2011, Vol. 111, pp. 915-924.
  9. Spilker T., Coenye T., Vandamme P., Puma J. Li PCR-Based Assay for Differentiation of Pseudomonas aeruginosa from Other Pseudomonas Species Recovered from Cystic Fibrosis Patients. Journal of Clinical Microbiolgy, 2004, Vol. 42, no 5, pp. 2074-2079.
  10. Suaad S. Microbiological and molecular identification of bacterial species isolated from nasal and oropharyngeal mucosa of fuel workers in Riyadh, Saudi Arabia. Saudi J of Biological Sciences, 2017, Vol. 24, no 6, pp. 1281-1287.